超濾離心管的分子量選擇及使用前預(yù)處理方法介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：7472 更新時(shí)間：2021-04-13
超濾離心管常用于做細(xì)胞培養(yǎng)上清的蛋白濃縮的實(shí)驗(yàn)，它會(huì)有一個(gè)類似于內(nèi)管和外管的兩個(gè)部分，內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜，當(dāng)高速離心時(shí)，分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了，分子量比它大的就截留在上面（即內(nèi)管中），這就是超濾的原理。
首先要為大家介紹的是超濾離心管的分子量選擇：
按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)碾x心超濾管，為了得到高收率，所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右，不超過(guò)目標(biāo)分子量的一半。因?yàn)槌瑸V膜上孔徑是平均孔徑，膜上的孔并非均勻，離心高壓下也可能滲漏，因此截留孔徑越小，流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大，可選擇較小容積的離心超濾管多次重復(fù)加樣離心。
如果同時(shí)需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì)，可將待濃縮樣品稀釋到離心超濾管大容積再離心，重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過(guò)長(zhǎng)時(shí)間或者過(guò)速離心，雖然高品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計(jì)，可避免過(guò)度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過(guò)度濃縮，體積越小，越容易因表面吸附而損失得率。離心后輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液，必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面，有助于減少膜表面吸附，能提高回收率。盡量避免接觸膜表面。
那么，在使用超濾離心管時(shí)需不需要進(jìn)行預(yù)處理呢？
通常不需要預(yù)處理即可使用，不過(guò)對(duì)于蛋白質(zhì)樣本處理，特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來(lái)說(shuō)(<10ug/mL)，用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。對(duì)本產(chǎn)品表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失，大多數(shù)情況下，在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率，因?yàn)槿芤嚎商顫M膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。
希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本產(chǎn)品的相關(guān)知識(shí)。
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